氯丙嗪快速檢測試劑盒
使用說明書
【測定原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA法檢測尿樣和組織等樣本中的氯丙嗪，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的原理來進行，樣本中的氯丙嗪和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭標(biāo)記有辣根過氧化酶的抗氯丙嗪抗體，通過洗滌后，用TMB底物顯色，樣品中的氯丙嗪含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出氯丙嗪含量。
【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度： 1ppb
檢測時間： 45min
樣本檢測下限：
尿 液………………………………… 3ppb
組 織………………………………… 2ppb
飼 料 ……………………………… 1ppb
交叉反應(yīng)率：
氯丙嗪（Salbutamol ）……………… 100%
樣本回收率：
尿 樣 ……………………… 85%±10%
組 織 ……………………… 85%±15%
飼 料 ……………………… 85%±15%
【試劑盒組成】
- 微量測試孔：1×96孔板（12條×8孔）
- 氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品溶液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb、1ppb、3ppb、9ppb、27ppb、81ppb
- 高濃度標(biāo)準(zhǔn)品：×1瓶：（1ml/瓶） 1ppm
- 酶標(biāo)記物 7ml……………………… 紅色帽
- 抗體工作液 7ml………………………… 綠色帽
- 底物A液 7ml …………………… 棕色帽
- 底物B液 7ml …………………… 黑色帽
- 終 止 液 7ml ………………… 黃色帽
- 2X濃縮復(fù)溶液50 ml ……………………藍(lán)色帽
- 20X濃縮洗滌液40 ml …………………白色帽
【 所用儀器、試劑】
具備的儀器：微孔酶標(biāo)儀、氮氣吹干裝置、打印機、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機、恒溫箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管
微量移液器：單道20µl-200µl、100µl-1000µl、多道 250µl
試 劑： 乙腈、甲醇、正己烷、無水硫酸鈉
【實驗前溶液配制】
配液1、將30ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
配液2：1X樣本復(fù)溶液
將2X濃縮復(fù)溶液用去離子水按照1：1稀釋（1 份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水）用于樣本的復(fù)溶。
【樣本前處理步驟】
樣本處理前須知
處理任何樣本時，都必須注意：
（1）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（2）實驗前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
（a）尿樣本的處理方法
取50µl清亮尿樣直接測定（如果尿樣渾濁一定要過濾或離心10min，4000r/min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。
由于尿液陰性樣本可能會產(chǎn)生背景干擾 （在某些情況下干擾數(shù)值在標(biāo)準(zhǔn)2到3之間），所以推薦標(biāo)準(zhǔn)3即0.3ppb作為尿液陽性結(jié)果的CUT OFF判斷值。
樣本稀釋倍數(shù)：1
（b）組織樣本（肌肉和肝臟）處理方法
稱取均勻后的組織樣本2±0.05g ，加入6ml乙腈溶液，充分振蕩2min。4000r/min以上，15℃離心10min；
1、 取上清液4ml，在56℃條件下氮氣或空氣流吹至*干燥；
肉樣本：
加入1ml 去樣本的復(fù)溶混合振蕩30s，取50µl用于分析。
肉樣本稀釋倍數(shù)：1
肝臟樣本：
加入2ml正己烷振蕩溶解，再加入1ml 樣本的復(fù)溶混合振蕩30s，4000r/min以上，15℃離心5min，去除上層；取50µl下層 與50µl樣本的復(fù)溶混勻；取50µl用于分析。
肝樣本稀釋倍數(shù)：2
（c）飼料樣品的處理方法
1、 稱1.0±0.05g研碎的飼料樣品，加入10ml甲醇，再加入5g無水硫酸鈉，放振蕩器上振蕩2min；15℃ 4000r/min以上離心10min；
2、 吸出離心后的上清液2ml，于56℃氮氣吹干，用1 ml 樣本復(fù)溶溶解干燥的殘留物，再加入1mL正己烷混合30s ；15℃ 4000r/min以上離心5min
3、 取50µl下層 與50µl去樣本的復(fù)溶混勻；取50µl用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：10
【酶標(biāo)免疫分析程序】
操作步驟：
1．將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2．按板架及需要取出微孔條，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3．編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
4．加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl /孔，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入抗體工作液50µl/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環(huán)境反應(yīng)30min。
5．取出用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被清除的氣泡用干凈的槍頭刺破）。
6．顯色：每孔加入底物液A液50µl再加B液50µl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境避光顯色15min。
7．測定：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定吸光度值（OD值）。
【結(jié)果判定】
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含氯丙嗪的含量成負(fù)相關(guān).
1、粗略判定：
用樣品的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出樣本所含氯丙嗪濃度范圍（ng/ml）。假設(shè)樣品1的吸光度值為0.313，樣品2的吸光度值為1.032，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為1.892；1ppb為1.501；3ppb為1.175； 9ppb為0.751；27ppb為0.421； 81ppb為0.198。則樣品1的濃度范圍是27ppb-81ppb；樣品2的濃度范圍是3ppb-9ppb。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯丙嗪實際濃度。
2、定量分析：
所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以第-個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B0）再乘以100%，即：
百分吸光度值（%）＝ | B | ×100% |
B0 |
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯丙嗪實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣品的準(zhǔn)確、快速分析。
3、標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲線：
B/B0 (%)
1 3 9 27 81
氯丙嗪(ppb) [µg/kg]：氯丙嗪檢測試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
%CV
0 1 3 9 27 81
氯丙嗪(ppb) [µg/kg]：氯丙嗪檢測試劑盒的精密度
由多個不同的實驗結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出氯丙嗪檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應(yīng)氯丙嗪濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項】
- 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒有回到室溫（20-25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
- 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
- 混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
- 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
- 不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。
- 不用的微孔板放進自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
- 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。
- 該試劑盒Z佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲存】原包裝應(yīng)儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】有效期12個月;生產(chǎn)日期、有效期、批號見外包裝。
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