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BCA蛋白定量試劑盒說明書
BCA Protein Assay Kit
BCA蛋白定量試劑盒
目錄號：K0014
保存條件：BSA標準品2-8℃保存，其它組分室溫保存。
組分說明
Cat. No. K0014
Kit Size 500 次/微孔，50 次/試管
試劑 A 100 ml
試劑 B 3 ml
BSA 標準品 （2mg/ml） 2 ml
本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途
產(chǎn)品簡介
BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產(chǎn)品是基于 BCA（Bicin
-choninic Acid）法研制而成，實現(xiàn)了對蛋白質(zhì)進行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測定。其
原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物，同時將Cu2+還
處原成有高的光吸收Cu+。BCA試劑值，可敏感特異地與顏色的深淺與蛋白Cu結(jié)質(zhì)濃合，形成度成正比，可根據(jù)吸收穩(wěn)定的有顏色的復(fù)值合物。在的大小來562測 定蛋nm
白質(zhì)的含量。本試劑盒含有牛血清白蛋白（ BSA）溶液作為蛋白質(zhì)標準品溶液，測定
范圍為20～2000 μg/ml。
注意事項
1．本產(chǎn)品可以采用分光光度計（試管檢測法）或者酶標儀（微孔檢測法）測定蛋白濃度。
2．建議每次測定蛋白樣品時，繪制標準曲線，以獲得準確數(shù)據(jù)。
3．BSA標準品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致（可用1×PBS或0.9%生理鹽水進行
稀釋）。
4．完成37℃孵育30分鐘或室溫孵育2小時后，須在3-5分鐘內(nèi)完成檢測，否則會影響蛋
白定量的準確度。
5．如待測樣品中含較多的干擾物質(zhì)（具體見附表1），可采用Bradford法蛋白定量試劑
盒（K0013）或其他蛋白定量產(chǎn)品。
操作步驟
1．稀釋BSA標準品：用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋BSA標準品。
管號 稀釋液用量（μl） BSA標準品用量（μl） BSA標準品終濃度（μg/μl）
A 0 100 2
B 200 200 1
C 200 200（從B管中取） 0.5
D 200 200（從C管中?。? 0.25
E 200 200（從D管中取） 0.125
F 200 200（從E管中?。? 0.0625
G 200 0 0（空白）
2．配置BCA工作液：
1）計算BCA工作液總量：
BCA工作液總量=（BSA標準品樣本個數(shù)+未知樣本個數(shù)）×復(fù)孔數(shù)×每個樣本BCA工作液體積
舉例：BSA標準品樣本個數(shù)為7個，未知樣本個數(shù)2個，復(fù)孔數(shù)3個。
試管檢測法：
BCA工作液總量=(7個BSA標準品樣本+2個未知樣本)×3個復(fù)孔×2 ml/每個樣本工作液體積=54 ml
微孔檢測法：
BCA工作液總量=(7個BSA標準品樣本+2個未知樣本)×3個復(fù)孔×200 μl/每個樣本工作液體積=5.4ml
2）根據(jù)計算出的BCA工作液需要總量，將試劑A和試劑B按照50：1的體積比，配制
BCA工作液，充分混勻。
注意：1）由于加樣可能存在誤差，建議配制BCA工作液時，多配制1-2個孔。
2）新配制的BCA工作液室溫密封條件下可穩(wěn)定保存24小時。
3．定量檢測
3a.試管檢測法（蛋白濃度檢測范圍：20-2000 μg/ml）
1）按上表，將稀釋好的A-G BSA標準品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各100 μl
分別加到作好標記的試管中。推薦每個測定的樣本做2-3個平行反應(yīng)。
2）向每個試管中各加入2 ml BCA工作液，充分混勻，37℃水浴中孵育30分鐘或室
溫孵育2小時。
3）將各管冷卻至室溫。
4）用分光光度計在562 nm處測定每個樣品及BSA標準品的吸光值，同時做好記錄。
5）繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。
3b.微孔檢測法（蛋白濃度檢測范圍：20-2000 μg/ml）
1）按上表，將稀釋好的A-G BSA標準品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各25 μl分
別加到作好標記的96孔板微孔中。推薦每個測定的樣本做2-3個平行反應(yīng)。
2）每孔加入200 μl BCA工作液，充分混勻，蓋上96孔板蓋，37℃孵育30分鐘。
3）冷卻至室溫。
4）用酶標儀在540-590 nm范圍內(nèi)，測定每個樣品及BSA標準品吸光值，做好記錄。
5）繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。
注意：1）BCA法測定蛋白濃度時，吸光值會隨著時間的延長不斷加深。因此所有樣品測定需在3-5 分鐘內(nèi)完成，否則會影響蛋白定量的準確度。
2）建議以去除背景值后的吸光值讀數(shù)繪制標準曲線。
3）由于操作誤差導(dǎo)致標準品讀數(shù)嚴重偏離線性曲線的應(yīng)舍去。
4）未知樣品濃度可以從標準曲線方程中計算得出, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。
5）如果得到的蛋白濃度不在檢測范圍內(nèi)，請重新稀釋樣品后再次測定。
4．BCA蛋白定量分析結(jié)果舉例：
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